PROF. UFUK GÜNDÜZ

Reversal of multidrug resistance in MCF-7 breast adenocarcinoma cell line by silencing interleukin 6 with RNA interference Doksorubisin dirençli MCF-7 hücre hattında interlökin-6’nın siRNA ile susturularak çoklu ilaç dirençliliğinin geri çevrilmesi

Kanserde çoklu ilaç dirençliliği, tek bir kemoterapötik ajanın tedavi amaçlı uzun süre uygulanmasından sonra, yapısal olarak birbirinden bağımsız birden fazla ilaca direnç gelişmesi olarak tanımlanır. Doksorubisine dirençli MCF-7 meme kanseri hücre hattında direnç gelişiminin önemli sebeplerinden biri MDR1 geni tarafından kodlanan, ATP bağlayıcı kaset taşıyıcı proteinlerinden P-glikoproteinin ifadesindeki artıştır. Interlökin 6 (IL-6) bazı kanser hücreleri de dahil çeşitli hücre tipleri üzerinde büyüme faktörü olarak etki gösteren bir sitokindir. Bu sitokinin kötü prognozla seyreden kanser hastalarının serum düzeylerinde normalden fazla bulunduğu gözlenmiştir. Ayrıca, hasta serum düzeyindeki IL-6 artışı çoklu ilaç dirençliliğinin de göstergesidir. MCF-7 hücre hattında, IL-6nın C/EBPß adlı transkipsiyon faktörünü aktive ederek MDR1 gen ifadesini arttırdığı ve Doksorubisin direncine sebep olduğu bilinmektedir. Bu çalışmanın amacı ilaç dirençli kanser hücre hatlarında IL6 genini RNAi yöntemiyle susturmak ve bunun çoklu ilaç dirençliliği üzerindeki etkisini gözlemlemektir. IL6 geninin susturulmasının IL6, MDR1 ve MRP1 genlerinin ifade düzeylerindeki etkisi qRT-PCR ile belirlenmiştir. Susturulmanın doğrulanması için hücre dışına salgılanan IL-6 miktarı hücre kültürü besi ortamından ELISA yöntemi ile ölçülmüştür. Ayrıca, hedef genin susturulmasının hücreleri yeniden Doksorubisine duyarlı hale getirip getirmediği XTT sitotoksisite analizi ile belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlara göre IL6 geni RNAi yöntemini kullanarak başarı ile susturulmuştur. Hücre kültürü besi ortamına salgılanan IL-6 miktarı siRNA uygulamasından 24 saat sonra %36 oranında düşmüştür. Ayrıca, IL6 gen ifadesi düzeyi 24 saatte ilk değerin %50?sine düşmüştür. MDR1 mRNA düzeyi ise IL-6 sinyal yolağının bloke edilmesiyle %45 oranında azalmıştır. IL-6 sinyal yolağıyla düzenlenmeyen MRP1 geninin ifadesi ise değişme göstermemiştir. Sitotoksisite analizleri dirençli MCF-7 hücrelerinin Doxorubisin?e %65 daha duyarlı oldunu göstermiştir. Bu çalışma, IL6 geninin susturulmasının Doksorubisine dirençli MCF-7 hücrelerinde ilaç dirençliliğini önemli ölçüde geri çevirebileceğini göstermiştir.