DOÇ.DR. SALİH YILDIZ

Glucose oxidase enzimi substrat, inhibitör ve aktivatörlerine ait kinetik parametrelerin tayini

ÖZET Bu çalışmada Aspergillus niger’den elde edilen Glukoz Oksidaz enziminin B-D-glukozu enzimatik olarak yükseltgeme reaksiyonu, aerobik ortamda farklı üç indikatör reaksiyondan faydalanarak spektrofotometrik teknik ile incelendi. Çalışmada inhibitörsüz veya aktivatörsüz ve değişik inhibitor ve aktivatler ile denemeler yapıldı; bunlara ait kinetik parametreler hesaplandı. 25°C da, pH’ı 7,0 olan 0,12 M fosfat tamponunda GOD-FOD- boya (o-dianisidin) metoduyla yapılan denemelerde inhibitörsüz veya aktivatörsüz durumda Kg= 2,°0419xl0 M bulundu. Bu metödla Na2S, NaN02, NaNO3 için rekabet edici (kompetitif) inhibisyon tesbit edildi ve inhibisyonun inhibitörlerin konsantrasyonları ile arttığı görüldü; inhibisyon sabiti Kj_, Na2S için 1,2955×10 M ve NaN02 için 6,3250xl0-4 M ve NaNO3 1, 2030×10″ 5 M olarak S-2 – bulundu. ve N-02 asidik ortamda dayanıksız oldukları için, inhibisyon etkileri sadece bu metodla incelenebildi. GOD-POD-boya metoduyla Na3,, Na2SO4 ile yapılan denemelerde esas olmayan aktivasyona uyan sonullar elde edildi ve aktivasyon sabiti KA ; NaN3 için 8,0729xlO-5 M ve Na2S04 için 1, 2069×10-4 M bulundu. 30°C da, pH’ı 6,1 olan 0,84 M fosfat tamponunda I3 fün ölçülmesine dayanan denemelerde inhibitörsüz veya aktivatörsüz durumda Ks – 1,9917×10-4M bulundu. NaNO3’ın inhibitor olarak kullanıldığı durumda kompetitif inhibisyon gözlendi ve inhibis yon sabiti Ki= 1,0674×10-3 M olarak hesaplandı. NaN3 ve Na2SO4 in kullanıldığı denemelerde esas olmayan aktivasyon elde edildi ve aktivasyon sabiti KA ; NaN3 için 8, 0840×10″-5 M ve Na2S04 ııı için l,2341×10-4 M bulundu. pH’ı 5,0 olan 0,5 M asetat tamponunda, 30°C da I-, molibdat ve o-tolidin bulunan ortamda yapılan denemelerde inhibitör- KS_ 1,9914*10-4 süz veya aktivat örsüz durumda KS- 1,9914×10 M bulundu. Bu seri denemelerde NaNO, için kompetitif inhibisyon tesbit edildi ve inhibisyon sabiti Ki=1,1733×10 -3 M olarak hesaplandı ; NaN3, NaoSO2, için esas olmayan aktivasyon belirlendi ve aktivasyon sabiti KA, NaN3, için 8,0612×10-5 M ve Na2S04 için l,2371xl0″”4 M bulundu. Çalışmada elde edilen sonuçlara göre I-3 ölçümüne dayanan metodun GOD-POD-boya metodundan daha hassas olduğu tesbit edildi, iv

Albumin’in izoelektrik noktasının sıcaklıkla değişiminin incelenmesi ve bazı proteinlerin elektroforetik ayrılması

II ö 2 E T Organizmanın büyüme ve gelişmesi için son derece lüzumlu olan proteinler; başta enzimler ve hormonlar olmak üzere, bazı organik moleküllerin yapısını teşkil ettikle rinden oldukça önemli bir araştırma materyali olmuştur. Kan plazması proteini devamlı dengede bulunmamakta buna bağlı olarak f i z ikok imyasal ve biyokimyasal özellikler değişebil mektedir, îzoelektrik nokta ( I.E.N. ) bu özellikler ara sında önemli yer tutan bir parametredir. Bu çalışmada Î.E.N. nm* sıcaklıkla değişimi ele alınarak incelenmiştir. Bu amaçla sığır plazma albumininin izoelektrik noktası, 9 °C de ve İS °C de selüloz asetat elektrof orezi metodu kullanı larak tayin edilmiştir. Ayrıca Coturnix coturnix türü bıl dırcın yumurta akı ile Konya Et ve Balık Kurumundan temin edilen sığır kan plazması da aynı metodla fraksiyonlandı- r ı Imıştır. Bu araştırma sonunda sığır plazma albuminin izoelekt rik noktası? 9 °C için 4?65, 10 °C için 4560 olarak bulun muştur. Sığır plazma albumini, sığır plazması ve bıldırcın yumurtasına ait UV pikleri» yürüme mesafeleri ve fraksiyon- lanma işlemleri fotoğraf ik olarak çalışmada verilmiştir.