DOÇ. DR. İSMAİL AKYOL

Streptococcus thermophılus’da -asetolaktat enzim üretiminin moleküler olarak artırılması Increasing of the -asetolactat enzyme production in streptococcus thermophilus as molecular

Bu çalışmanın amacı doğal olarakizole edilen ve aromatik olarak istenilen özellikleri taşıyan Streptococcus thermophilusbakterisinde als geninin genetik modifikasyonu ile genetik olarak metabolit üretimi arttırılmışS.thermophilussuşları oluşturmaktır. Çalışmada pirüvat metabolik yolundaki metabolit üretimlerinin mekanizmasını anlamak için diasetil, asetoin, 2-3 bütandiol metabolik yolunda rol alan alsgeninin pGEMT easy vektöre klonlanarak pGA85 plazmiti oluşturulmuş ve oluşturulan pGA85?ten kesilenalsgen bölgesi pNZ276 plazmitine klonlanmış ve pMMG131 plazmiti oluşturulmuştur. pMMG131 plazmiti elektroporasyonla NCFB2393 suşuna aktarılarak transformant StrMMG131 suşu oluşturulmuştur. alsgeninin overekspresyonu ile artırdığımetabolit seviyesi HPLC analizi ile belirlenmiştir. Anahtar Kelimeler:Streptococcus thermophilus, aromatik metabolitler, pirüvat metabolik yolu, alsgeni, diasetil, asetoin, 2-3 bütandiol, pNZ276, NCFB2393, StrMMG131, HPLC

Streptococcus thermophilus bakterisinde asetaldehit kodlayan glyA geninin klonlanması ve E. coli’de overekspresyonu Cloning of Streptococcus thermophilus acetaldehyde encoded glyA gene and overexpression in E. coli

Süt ürünleri endüstrisinde kullanılan starter kültürlerin fermentasyonu sonucu üretilen karbonil bileşiklerden asetaldehit, yoğurtta bulunan temel aroma maddelerinden biridir. Çalışmada asetaldehit üretiminden sorumlu Streptococcus thermophilus suşundan spesifik ileri ve geri primerler kullanılarak glyA gen bölgesi PZR ile çoğaltılmış ve çoğaltılan PZR ürünü pGEM-T vektörüne ligasyon ile klonlanmıştır. Elde edilen yeni plazmit CaCl2 metodu ile referans E. coli suşu olan MC1022’ye aktarılmıştır. Transformant plazmitin ve klon DNA parçasının doğruluğu kesme enzimi, PZR ve dizileme yöntemiyle teyit edilmiştir. glyA geni taşıyan transformant plazmit ile üretilen asetaldehit miktarı HPLC ile belirlenmiştir. HPLC sonuçları ile E. coli’de glyA geni tarafından üretilen SHMT enziminin aşırı üretiminin asetaldehit üretimini arttırdığı gözlenmiştir. Bu sonuçlara göre oluşturulan transformant plazmit olan pIK86 suşu potansiyel asetaldehit üretilen bir E. coli suşudur. glyA geni klonlanmış pIK86 plazmidi Streptococcus thermophilus uyumlu plazmitlerle birleştirildiğinde tipik yoğurt aromasının oluşumuna olumlu katkı sağlayabileceği düşünülmektedir.

Alternatif karbonhidrat kaynaklarında maya kültürlerinin biyoetanol üretim potansiyelinin araştırılması

Bu çalışmada, Kluyveromyces marxianus ve Saccharomyces pastorianus maya kültürleri ile peyniraltı suyu, şeker pancarı, keçiboynuzu ve havuç alternatif karbonhidrat kaynağı olarak kullanılarak fermentasyon yoluyla biyoetanol üretimi amaçlanmıştır. Karbonhidrat kaynakları hazırlandıktan ve sterlizasyon yapıldıktan sonra aynı fermentasyon sıcaklığı ve başlangıç pH değerinde fermentasyon gerçekleştirilmiştir. Günlük olarak karbonhidrat kaynaklarından kullanılan şeker ve üretilen etanol miktarları HPLC ile belirlenmiştir. Fermentasyon sonununda canlı hücre sayımları yapılmıştır. Diğer taraftan üretilen etanol miktarı distilasyon düzeneği kullanılarak elde edilmiştir.